产品货号：
BTN14-47600
中文名称：
病毒荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
John Cunningham Virus(JCV)JC qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司开发了简单快捷的JC病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒。
JC病毒(John Cunningham Virus，JCV)属于乳多空病毒科(Papovaviridae)多瘤病毒属(Orthopolyomavirus)，1971年从进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leukoencephalopathy，PML)患者的脑中分离并以该患者名字命名，普通人群血清阳性检测率为40%～60%，因AIDS并发PML的患者致死率约为50%，对于免疫力缺陷和免疫力低下的既往感染者，还会引起多瘤病毒相关性肾病(polyomavirus-associated nephropathy，PVAN)、病毒血症等相关疾病，并与胃癌、肺癌、食管癌等癌症的发生密切相关，但其致病机理尚未阐明。由于目前无特异的预防和治疗方法，因此在病毒感染早期的准确检测对疾病的诊断和治疗十分关键，尤其在免疫低下的人群中实现高效、精准、及时的检测至关重要。
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：病毒荧光定量PCR试剂盒(染料法)，John Cunningham Virus(JCV)JC qPCR Kit(SYBR)
JC病毒(John Cunningham Virus，JCV)属于乳多空病毒科(Papovaviridae)多瘤病毒属(Orthopolyomavirus)，1971年从进行性多灶性白质脑病(progressive multifocal leukoencephalopathy，PML)患者的脑中分离并以该患者名字命名，普通人群血清阳性检测率为40%～60%，因AIDS并发PML的患者致死率约为50%，对于免疫力缺陷和免疫力低下的既往感染者，还会引起多瘤病毒相关性肾病(polyomavirus-associated nephropathy，PVAN)、病毒血症等相关疾病，并与胃癌、肺癌、食管癌等癌症的发生密切相关，但其致病机理尚未阐明。由于目前无特异的预防和治疗方法，因此在病毒感染早期的准确检测对疾病的诊断和治疗十分关键，尤其在免疫低下的人群中实现高效、精准、及时的检测至关重要。
- 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
- 根据JC病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
- 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
- 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
- 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
- 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| JC病毒染料法qPCR引物混合物 | 100μL |
| JC病毒染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、稀释PCR阳性对照(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液(最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL 1×108拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×104拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×105
拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。 - 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的一管式病毒DNA提取试剂盒或其升级版柱式病毒DNA提取试剂盒。本试剂盒免费赠送20次免核酸提取的核酸释放剂，其使用手册可从本公司网站www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果做定量分析并且只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做1次重复，则标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照(用水做模板)，1个用于PCR阳性对照(用第4号阳性对照稀释液，浓度为10000拷贝/μL)。下面只描述定量分析的步骤，定性分析只是把6个标曲反应缩减成1个，其余不变。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管PCR阳性对照管
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL JC病毒染料法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL N+2待测样品DNA模板 6μL 不加 不加 第7步所得PCR阳性对照稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(40个循环)95℃ 15秒 60℃ 60秒
四、数据处理
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：病毒荧光定量PCR试剂盒(染料法)，John Cunningham Virus(JCV)JC qPCR Kit(SYBR)